Anti-mouse Ly6G 单克隆抗体（常用 clone 1A8）可用于小鼠体内选择性耗竭 Ly6G⁺ 中性粒细胞，是研究中性粒细胞在炎症、感染、肿瘤及组织损伤等疾病模型中功能的常用实验方法。经典研究表明，1A8 对 Ly6G 具有较好的选择性，可显著降低外周血中性粒细胞，而相较于传统 anti-Gr-1 抗体，对 Ly6C⁺ 单核细胞的影响更小。

推荐实验参数

简要实验流程

Anti-Ly6G 给药 → 约 24 h 后检测或建立实验模型 → 流式验证 depletion efficiency → 长周期实验根据中性粒细胞恢复情况重复给药。

给药方式方面，i.p. 是文献中非常常见的方式。经典的 1A8 depletion 研究多采用腹腔给药，例如 Daley 等建立的 Ly6G 特异性耗竭方法以及后续大量研究。

i.v. 同样可行。已有研究采用 tail-vein intravenous injection of anti-Ly6G clone 1A8 实现系统性中性粒细胞耗竭，并根据中性粒细胞恢复速度重复给药。

实验注意事项

不同小鼠品系、年龄、疾病模型、抗体 Fc 亚型及实验周期均可能影响耗竭效率，因此建议把文献剂量作为起始参考条件，并通过外周血或目标组织实际验证 depletion efficiency。已有综述及实验研究指出，1A8 的耗竭持续时间和效率在不同实验条件下存在明显差异。

使用 clone 1A8 进行体内耗竭后，需要特别注意 epitope masking（表位遮蔽）。

体内注射的 1A8 抗体可持续占据中性粒细胞表面的 Ly6G，从而影响后续再次使用相同 clone 进行流式检测。

因此，如果直接使用 1A8 作为检测抗体，可能出现：

“Ly6G 信号明显降低，但实际上部分中性粒细胞仍然存在”

这可能导致对 depletion efficiency 的高估。

Boivin 等人在 Nature Communications 的系统研究中专门讨论了这一问题，并强调了验证 anti-Ly6G depletion 时检测策略的重要性。

因此可考虑：

• 使用与 depletion antibody 不竞争的检测抗体
• 联合其他中性粒细胞标志物
• 使用替代性的 gating strategy
• 必要时结合细胞形态学或组织学验证

短期与长期实验

对于短期实验，单次给药在部分模型中可能已经足够。

对于持续数天甚至数周的实验，则通常需要重复给药，因为骨髓会持续生成新的中性粒细胞并释放进入外周血。

长期实验尤其建议：

定期采血检测中性粒细胞比例，而不是仅按照固定给药时间表推测 depletion 状态。

代表性参考文献

Boivin G, et al.
Durable and controlled depletion of neutrophils in mice.
Nature Communications. 2020;11:2762.
该研究系统评估了 anti-Ly6G clone 1A8 在小鼠体内中性粒细胞耗竭中的持续时间、品系差异、表位遮蔽以及长期 depletion 策略，是 anti-Ly6G depletion 实验非常有代表性的方法学参考文献。

Neutrophils direct preexisting matrix to initiate repair in damaged tissues.
Nature Immunology. 2022.
研究采用 anti-Ly6G clone 1A8 进行体内中性粒细胞 depletion，给药剂量约为 200 μg/20 g body weight。

Myeloid-derived suppressor cells control B cell accumulation in the central nervous system during autoimmunity.
Nature Immunology. 2018.
研究在 EAE 模型中通过重复给予 anti-Ly6G clone 1A8 耗竭 Ly6G⁺ 细胞，并对 depletion efficiency 进行了验证。